Mutagenitási teszt (Ames-teszt)

Budapest University of Technology and Economics, Department of Applied Biotechnology and Food Science, Environmental Microbiology and Biotechnology Group

Organisation/Data provider's nameBudapest University of Technology and Economics, Department of Applied Biotechnology and Food Science, Environmental Microbiology and Biotechnology Group
Name of contact
Dr. Molnár Mónika, Dr. Feigl Viktória
Telephone/fax
+36-1-4632347
Method Hungarian nameMutagenitási teszt (Ames-teszt)
Method name
Mutagenicity test
Stage of development
after application
Patent number
ISO 16240:2005
Method type
laboratory test: mutagenicity test
Mutagenicity tests
number of revertant
Carciogenity test
mutagenicity
Endpoint of the test
NOEC / NOEL No Observed Effects Concentration / Level
LOEC / LOEL: Lowest Observed Adverse Effects Concentration / Level
Number of mutants
Ration of mutants
Other endpoint
revertánsok koncentrációfüggés
Number of used species
single species test
Number of other species
több eltérő törzs
Test organisms
Bacterium
Exposition scenario
Characterisation of air
Duration of the test
short term = acute
Reproducibility (%)
90.00
Deviation (%)
30.00
Selectivity
non-selective
Instrument/equipment needed to perform the measurement
általános mikrobiológiai labor-eszközök
Other necessary equipment/tools
rázógép, termosztát
Standard materials for the test
4-nitro-feniléndiamin, benza(a)pirén vagy amino-fluorén oldatok
Reagents/materials for the test
tápoldatok, táptalajok, S9-mix (patkánymáj extraktum, NADP, glü-6P),
How many samples are needed
1-2 gramm vagy ml
How many tests can be performed simultaneously with one equipment
20
Data processing level
data input in PC, data evaluation by excel or other software
Necessary qualification
higher education (chemist, chemical eng., biologist, bioeng, environmental eng, microbiologist, agroeng)
Type of laboratory for testing
microbiological laboratory
Purchase price of the equipment
below 40 Euro
Estimated equipment cost
below 40 Euro
Labour cost/measurement
2 - 4 Euro
Total cost/measurement
20 - 40 Euro
Brief concise description explaining the innovation

A teszteléshez olyan Salmonella tesztbaktériumokat alkalmazunk, melyek hisztidin-operonja (szabályozó szakasza) többféle mutációt hordoz, emiatt ezek a törzsek nem képesek hisztidin szintézisére, így növekedésük gátolt, kivéve, ha újabb mutáció vagyis reverz-mutáció visszaállítja a tesztorganizmus mutációval elrontott génszakaszát.

Typical (recommended) application of the method

Az Ames-teszt egy gyors, reverz-mutációs teszt, mely olyan vegyi anyagok kiszűrésére szolgál, melyek genetikai károsodást okoznak, így mutációhoz vezetnek vagy indukálják a mutációt. Állatkísérletek helyett, illetve azokat megelőzően használják tájékozódási céllal. Ha az Ames teszt pozitív, akkor az anyag mutagén. Ha az Ames teszt negatív, még nem zárható ki hogy emberre, állatra mutagén hatású vagy karcinogén.

Limits of the method

Az eredmények interpretációja állatkísérletekkel való összahsonlítás nélkül nehéz. Ma már elég sok eredmény áll rendelkezésre, hogy a Salmonellákat modellrendszerként alkalmazzuk. Így is előfordul, hogy eltérés mutatakozik, pl. a pentaklórfenol esetében: állati teszttel mérve mutagén, karcinogén, Ames-teszttel negatív.

Is there any Protocol
yes
Detailed Protocol

ISO 16240:2005

Costs
3-medium
Time requirement
4-low
Workload requirement
2-high
Equipment, apparata requirement
4-low
Qualified labour
3-medium
Environmental risk and workplace risks
3-medium
Environmental reality
4-good
Adequate accuracy
3-average
Reproducibility
3-average
Cost efficiency
4-good
Feasibility
4-good
Availability
3-average
Well known
3-average
Strengths

Nincs különösebb műszerigénye, sokkal drágább, munkaigényesebb és etikailag is kifogásolható állati tesztek válthatóak ki vele. Sok ismátlés végezhető, ezzel javítható a mérés statisztikája.

Weaknesses

A mutáció statisztikai jelenség, pontosan reprodukálni nehéz, több párhuzamos mérést igényel. Mindazonáltal a mutációk számának koncentrációfüggését vizsgálva egyértelművé tehető a pozitív hatás és lehet statisztikai értékelést végezni.

Possibilities

Az eredmények alapján állatkíséletek nélkül is megbecsülhetjük a mutagenitást és karcinogenitást. Egyes vegyi anyagok emberi emésztés során történő aktíválódását in vitro előkezeléssel modellezhetjük.
Eltérő mutációkat tartalmazó tesztorganizmusok keverékével több, eltérő mechanizmusú mutagén anyag hatását is ki lehet mutatni.

Threats

Az emlősökön végzett állatkísérletek eredményei és az Ames teszt eredményei körülbelül 80%-os egyezést mutatnak, vagyis egyes esetekben alulbecsüli a mutagenitást, míg más esetben túlbecsüli.

Important findings, points of interest, remarks

Egyes anyagok nem mutatkoznak mutagénnek, holott állatkísérletekben mutagének, illetve karcinogének.
Ha nem ismert aszennyezőanyag, és annak mutációt okozó hatásmechanizmusa, akkor az eltérő Salmonellák keverékét érdemes használni, hogy ne kaphassunk hamis negatív eredményt.

Publications

Maron, D. M.; Ames, B. N.: Revised methods for the Salmonella mutagenicity test Mutation Research, 113, pp. 173-215, 1983

OECD 471 http://www.oecd.org/dataoecd/18/31/1948418.pdf

Location of the application, country
Magyarország
Location of the application, town and/or region
Budapest
Application area
Measurement of the effect/physical-chemical properties of the chemical substance
Environmental problem the method was applied to (old)
Direct, effect based decision systems
Derivation of effect based environmental quality criteria
Measurement of the harmful effect: Toxicity, mutegenity and teratogenity testing of chemical substances
Other environmental problem
Vegyi anyagok általános kockázatának mérése
Lessons learned

A pentaklórfenol (PCP) vizes oldata nem mutatott mutagenitást.
Az emésztés modellezésére használt előkezelés sem eredményezett mutagén hatást a PCP-nél.
Ugyanakkor a ciklodextrin-PCP komplex tezstelése pozitív lett. Lásd még a 314. számú űrlapot: 'Ciklodextrin adalék alkalmazása talajmutagenitási teszthez'.

Datasheet id (original)
42
Creator
Gruiz Katalin
Status
Verified
Adatlap típusaBiological, ecotoxicological assessment and monitoring methods
Létrehozás
Módosítás