Budapest University of Technology and Economics, Department of Applied Biotechnology and Food Science, Environmental Microbiology and Biotechnology Group
Gyors, reverz-mutációs teszt, mely olyan vegyi anyagok kiszűrésére szolgál, melyek genetikai károsodást okoznak, így mutációhoz vezetnek. A módosított Ames-teszt segítségével talajminták vagy más szilárd minták direkt kontakt tesztelése történik kivonatkészítés nélkül, a szennyezett talaj vagy más közeg folyamatos jelenlétében, a tesztorganizmus folyamatos kitettsége mellett.
Mutagén anyagokkal, így mutagén szervetlen és szerves szennyzőanyagokkal szennyezett talajok tesztelésére, szilárd hullladékok, élelmiszerek direkt kontakt tesztelésére. A revertánsok számának háttérértékhez képesti növekedését, illetve a revertánsok/mutánsok koncentrációfüggését mérhetjük. alapján.
A mintát sterilezni kell a teszt előtt, illékony talajszennyezőanyagok hatásának vizsgálatához nem alkalmazhatunk hősterilezést.
Ames teszt alkalmazása teljes talajra: a sterilezett szennyezett talajt és a szükséges adalékokat tápagarba keverjük, majd megszilárdulás után felületére szélesztjük a mutagenitási teszthez használt Salmonella törzs megfelelő sejtkoncentrációjú szuszpenzióját. A feltételezett mutagén anyagból koncentrációsort készítünk és a revertánsok számát a koncentráció függvényében vizsgáljuk. Hasonlíthatjuk a szennyezetlen talajban mért alapértékhez képest is. Ha van koncentrációfüggés és a revertánsok száma legalább kétszerese a háttérértéknek, akkor a teszt pozitív, a minta (anyag) mutagén.
Olcsó, viszonylag egyszerűen kivitelezhető teszt, nagyszámú minta is tesztelhető egyidőben. A talajjal való közvetlen érintkezés - a kivonatok használatával ellentétben - a teszt teljes ideje alatt lehetővé teszi a mutagén anyag és a tesztorganizmus interakcióját. Ezzel mintegy kumulált végpont-jértéket kapunk, vagyis megnövelhetjük a módszer érzékenységét.
A mikroorganizmus genoptípusának megőrzése nehéz és folyamatosan ellenőrizni kell.
A mutagén anyagok korlátozott biológiai hozzáférhetősége gyakran hibás negatív eredményt ad, ez hozzáférhetőséget növelő adalékanyagokkal kiküszöbölhető.
A talajmátrix 'árnyékoló' hatása csökkentheti is a káros hatást.
Sokféle környezeti elemre alkalmazható.
A mintaelőkészítés során a feltáródást, az emésztés hatását modellező kezelést alkalmazhatunk.
A hozzáférhetőség növelésével pesszimista modellt hozhatunk létre, így a mérési eredmények közvetlenül felhasználhatóak döntések meghozatalára. A pesszimista környezeti modellhez javasoljuk a 314, 348, 349-es módszerek almalmazását, melyek ezzel a teszttel jól kombinálhatóak.
Potenciálisan mutagén anyagokkal/mintákkal kell dolgozni. Megfelelő védőfelszereléssel és elővigyázattal a kockázat elfogadható szintre csökkenthető.
A szennyzett talaj és a tesztorganizmus közvetlen érintkezése bizotsított a teszt teljes ideje alatt. A talaj mutagenitást árnyékoló hatása, vagy éppen a fordítottja a tezstorganizmus és a körülmények mobilizáló és aktíváló hatása összegződik az eredményben. Ez növeli a teszt környezeti realitását elsősorban az ökoszisztéma jellemzését szolgálja, de az emberre történő extrapoláció is lehetséges.adalékanyagok alkalmazását nem csak előkezelés formájában teszi lehetővé, hanem a teszt teljes ideje alatt.
Hajdu, Cs.; Gruiz, K.and Fenyvesi, É.: Cycodextrin enhanced mutegenicity of pentachlorphenol – In: Proceedings of the 10th International UFZ-Deltares/TNO Conference on Soil-Water Systems in cooperation with Provincia di Milano, ConSoil 2008, 'CD' (3–6 June, 2008, Milano, ISBN 978-3-00-024598-5), Theme D, 436–443, 2008
Az alkalmazott direkt kontakt tesztet sikeresen alkalmaztuk fémekkel szennyezett talaj, érc, meddőkőzet és egyéb bányászati hullaldékok mutagenitásának tesztelésére. A szennyezőanyagok koncentrációja, kémiai formája, hozzáférhetősége, a hulladék feltártsága befolyásolta az eredményt.
Pentaklórfenollal (PCP) szennyezett talaj mutagenitása hozzáférhetőséget növelő adalék (cyclodextrin) jelenlétében a direkt kontakt teszttel pozitív eredményt adott, holott a PCP az Ames-teszttel saját méréseink és a szakirodalom szerint is negatív, annak ellenére, hogy állatkísérletekben mutagén.