Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Tanszék, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudományi Tanszék, Környezeti Mikrobiológia és Biotechnológia Kutatócsoport
- Egyéb szervetlen vegyi anyagok
- Egyéb szerves vegyi anyag
Az Azomonas agilis dehidrogenáz enzimaktivitásának gátlását mérő környezettoxikológiai teszt. Szennyezőanyag jelenlétében az elektrontranszport rendszer megsérülhet. Alternatív elektronakceptort, TTC-t adunk a tesztelegyhez, mely az elektrontranszportlánc működése során redukálódik, piros trifenil-formazánná alakul. Toxikus anyag jelenlétében a dehidrogenáz enzimaktivitás gátolt, a TTC redukciója nem történik meg, a piros szín nem jelenik meg vagy intenzitása kisebb, mint a szennyezetlen kontrollé.
Környezeti minták, vizek csurgalékok, talajminták, hulladékok toxicitásának meghatározása, szennyezett területek felmérése, monitoring
A mikroba nem minden szennyező anyagra érzékeny. Toxicitást mér, a toxikus anyag mennyiségi meghatározására nem alkalmas.
Az Azomonas agilis-t ferde Fjodorov tápagaron tartjuk fenn. Átoltás után 48 órán át 28 ºC-on inkubáljuk.
A teszthez 30 ml steril Fjodorov táptalajba, Azomonas agilis-t oltunk be, az inokulumot 72 órán át 28 ºC-on rázógépen rázatjuk.
A vizsgálandó mintákból 2-2 ml folyadékot vagy talaj/hulladék kivonatot egy órán keresztül, áramló gőzben sterilezzük, majd hígítási sort készítünk. A bemérést steril körülmények között végezzük. Idegen mikroorganizmusok gátolhatják az Azomonas agilis szaporodását.
Az azomonas agilis tenyészet 5 ml-éből, 1 ml 1%-os TTc oldatból és 100 ml Fjodorov-tápoldatból keveréket készítünk, melyet rámérjük az elkészített hígítási sor tagjaira, homogenizáljuk (Vortex segítségével), 72 órán át 28 ºC-on sötétben inkubáljuk.
Referenciaként 10 ppm koncentrációjú Cu oldatot használunk. Az értékelést 72 óra múlva végeztük, vizuális módon. A piros szín megjelenése mikrobiális tevékenységre utal. Toxikus anyagok jelenlétében a dehidrogenáz enzimaktivitás gátolt, a TTC redukciója nem történik meg, a piros szín nem jelenik meg, vagy intenzitása kisebb, mint a szennyezetlen kontrollé. Ahol a piros szín nem jelenik meg, az enzimaktivitás gátlás 100%, 50%-os gátlás esetében halvány piros szín látható. A piros szín megjelenése mikrobiális tevékenységre utal (nincs gátlás).
A bemért talajmennyiségek (és Cu-mennyiségek) függvényében ábrázoljuk a gátlás-értékeket. A kapott dózis-válasz görbéről leolvassuk az 50% enzimaktivitás-gátláshoz tartozó dózis-értékeket (ED50).
Mind vegyi anyagra, mint környezeti mintára alkalmazható. 2-3 nap elteltével eredményt kapunk. Kis eszközigény jellemzi, speciális berendezést nem igényel, aktuális toxikus hatást mér, több egymás mellett előforduló szennyezőanyag együttes toxicitását mérük vele.
Kémiai analitikai eredményekkel integráltan alkalmazva felhívja a figyelmet a kémiai analízissel nem mért vagy nem mérhető szennyezőanyagok káros hatására.
A tesztorganizmus érzékenysége és változékonysága egyszer-egyszer a megszokottól eltérő eredményt okoz.
A végpontot jelentő színanyag létrejöttét környezeti körülmények befolyásolják, így elsősorban a fény, melyet ki kell zárni a tesz alatt.
A szabvány szerinti vizuális értékelés nem elég érzékeny, ezért ha kvantitatív eredmény szeretnénk kapni, a színanyagot szerves oldószerrel ki kell extrahálni a tesztszuszpenzióból és fotométerrel meghatározni a pontos mennyiségét. A vizuális kiértékelés csak tájékoztató jellegű.
A mikroorganizmus gyors szaporodása és nagy egyedszáma javítja a teszt statisztikáját. Sziárd mintákból készült szuszpenzió tesztelésére is alkalmas, ilyenkor a környezeti minta a teszt teljes ideje alatt érintkezik a tesztorganizmussal.
Az eredmények nem helytálló interpretálása.
A vizuális értékelés a zavaró hatások miatt félrevezető lehet.
BME saját fejlesztését, szilárd anyagok vizes szuszpenziójának tesztelését és értékelését a 41. számú adatlapon mutatjuk be. A tesztorganizmus besorolása megváltozott, emiatt a neve is változott, régi neve Azotobacter agile
MSZ 21978/30-1988
A vizuális kiértékelés nem tesz kvantitatív értékelést lehetővé. A kisebb szinintenzítás különbségek vizuálisan nem értékelhetőek, így a végeredmény igen-nem formában adható meg. Szűrővizsgálatra, annak eldöntésére, hogy a minta toxikus vagy nem megfelelő teszt.