Data provider
Budapest University of Technology and Economics, Department of Applied Biotechnology and Food Science, Environmental Microbiology and Biotechnology Group
Contact details
Compulsory sheet
Information on the method
Measured endpoint
Description of the measurement technique
Measuring range
- Other inorganic chemical compounds
Measuring range
- Other organic chemical substance
Implementation conditions
Implementation costs
Innovation, main features
Az Azomonas agilis dehidrogenáz enzimaktivitásának gátlását mérő környezettoxikológiai teszt. Szennyezőanyag jelenlétében az elektrontranszport rendszer megsérülhet. Alternatív elektronakceptort, TTC-t adunk a tesztelegyhez, mely az elektrontranszportlánc működése során redukálódik, piros trifenil-formazánná alakul. Toxikus anyag jelenlétében a dehidrogenáz enzimaktivitás gátolt, a TTC redukciója nem történik meg, a piros szín nem jelenik meg vagy intenzitása kisebb, mint a szennyezetlen kontrollé.
Környezeti minták, vizek csurgalékok, talajminták, hulladékok toxicitásának meghatározása, szennyezett területek felmérése, monitoring
A mikroba nem minden szennyező anyagra érzékeny. Toxicitást mér, a toxikus anyag mennyiségi meghatározására nem alkalmas.
Az Azomonas agilis-t ferde Fjodorov tápagaron tartjuk fenn. Átoltás után 48 órán át 28 ºC-on inkubáljuk.
A teszthez 30 ml steril Fjodorov táptalajba, Azomonas agilis-t oltunk be, az inokulumot 72 órán át 28 ºC-on rázógépen rázatjuk.
A vizsgálandó mintákból 2-2 ml folyadékot vagy talaj/hulladék kivonatot egy órán keresztül, áramló gőzben sterilezzük, majd hígítási sort készítünk. A bemérést steril körülmények között végezzük. Idegen mikroorganizmusok gátolhatják az Azomonas agilis szaporodását.
Az azomonas agilis tenyészet 5 ml-éből, 1 ml 1%-os TTc oldatból és 100 ml Fjodorov-tápoldatból keveréket készítünk, melyet rámérjük az elkészített hígítási sor tagjaira, homogenizáljuk (Vortex segítségével), 72 órán át 28 ºC-on sötétben inkubáljuk.
Referenciaként 10 ppm koncentrációjú Cu oldatot használunk. Az értékelést 72 óra múlva végeztük, vizuális módon. A piros szín megjelenése mikrobiális tevékenységre utal. Toxikus anyagok jelenlétében a dehidrogenáz enzimaktivitás gátolt, a TTC redukciója nem történik meg, a piros szín nem jelenik meg, vagy intenzitása kisebb, mint a szennyezetlen kontrollé. Ahol a piros szín nem jelenik meg, az enzimaktivitás gátlás 100%, 50%-os gátlás esetében halvány piros szín látható. A piros szín megjelenése mikrobiális tevékenységre utal (nincs gátlás).
A bemért talajmennyiségek (és Cu-mennyiségek) függvényében ábrázoljuk a gátlás-értékeket. A kapott dózis-válasz görbéről leolvassuk az 50% enzimaktivitás-gátláshoz tartozó dózis-értékeket (ED50).
SWOT (evalaution based on scores)
SWOT (evaluation in words)
Mind vegyi anyagra, mint környezeti mintára alkalmazható. 2-3 nap elteltével eredményt kapunk. Kis eszközigény jellemzi, speciális berendezést nem igényel, aktuális toxikus hatást mér, több egymás mellett előforduló szennyezőanyag együttes toxicitását mérük vele.
Kémiai analitikai eredményekkel integráltan alkalmazva felhívja a figyelmet a kémiai analízissel nem mért vagy nem mérhető szennyezőanyagok káros hatására.
A tesztorganizmus érzékenysége és változékonysága egyszer-egyszer a megszokottól eltérő eredményt okoz.
A végpontot jelentő színanyag létrejöttét környezeti körülmények befolyásolják, így elsősorban a fény, melyet ki kell zárni a tesz alatt.
A szabvány szerinti vizuális értékelés nem elég érzékeny, ezért ha kvantitatív eredmény szeretnénk kapni, a színanyagot szerves oldószerrel ki kell extrahálni a tesztszuszpenzióból és fotométerrel meghatározni a pontos mennyiségét. A vizuális kiértékelés csak tájékoztató jellegű.
A mikroorganizmus gyors szaporodása és nagy egyedszáma javítja a teszt statisztikáját. Sziárd mintákból készült szuszpenzió tesztelésére is alkalmas, ilyenkor a környezeti minta a teszt teljes ideje alatt érintkezik a tesztorganizmussal.
Az eredmények nem helytálló interpretálása.
Other information, references
A vizuális értékelés a zavaró hatások miatt félrevezető lehet.
BME saját fejlesztését, szilárd anyagok vizes szuszpenziójának tesztelését és értékelését a 41. számú adatlapon mutatjuk be. A tesztorganizmus besorolása megváltozott, emiatt a neve is változott, régi neve Azotobacter agile
MSZ 21978/30-1988
Completed applications
A vizuális kiértékelés nem tesz kvantitatív értékelést lehetővé. A kisebb szinintenzítás különbségek vizuálisan nem értékelhetőek, így a végeredmény igen-nem formában adható meg. Szűrővizsgálatra, annak eldöntésére, hogy a minta toxikus vagy nem megfelelő teszt.